Pektinaasiaktiivisuusmenetelmän validointi ja käyttöönotto
Pajunen, Lumi (2019)
Pajunen, Lumi
2019
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201905078130
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201905078130
Tiivistelmä
Tämän opinnäytetyön tarkoituksena oli validoida ja lopulta ottaa käyttöön uusi kolorimetrinen pektinaasientsyymiaktiivisuusmenetelmä vanhan viskosimetrisen menetelmän tilalle Roal Oy:n laadunvalvontalaboratoriossa. Vanhasta menetelmästä haluttiin luopua siinä havaittujen käyttövaikeuksien vuoksi verrattuna muihin analyyttisiin menetelmiin. Lisäksi vanha käytössä ollut substraatti tuli korvata uudella valmisteella.
AB Enzymes suoritti uuden menetelmän optimoinnin Darmstadtin toimipisteessä Saksassa, ja sen todettiin soveltuvan vanhan menetelmän korvaajaksi. Myös uusi substraatti testattiin optimoinnin yhteydessä, ja vanha käytössä ollut Copenhagen X-2955-substraatti päätettiin vaihtaa uuteen Pectin-C-valmisteeseen.
Validointi toteutettiin optimoinnin tietojen pohjalta ja se suoritettiin neljällä erilaisella nestemäisellä entsyymivalmisteella, joiden aktiivisuustasot olivat toisistaan poikkeavia. Validoitaviksi parametreiksi valittiin menetelmän toistettavuus ja uusittavuus, joista laskettiin myös mittausepävarmuudet. Lisäksi menetelmän lineaarisuus tarkistettiin ja menetelmälle määritettiin toteamis- ja määritysraja.
Tulosten tarkastelussa keskityttiin pitkälti suhteellisten keskihajontojen tuloksiin, joiden tuli pysyä noin 10 prosentissa tai alle, jotta tuloksia voitiin pitää validoinnin osalta onnistuneina. Tämän osalta kaikki entsyymivalmisteet osoittivat menetelmän olevan luotettava. Lisäksi lineaarisuuden todettiin olevan hyvä.
Validoinnin aikana huomattiin suurehkoa absorbanssien hajontaa, joka osaltaan vaikutti mittausepävarmuuksiin. Mittausepävarmuudet eivät kuitenkaan olleet ratkaiseva tekijä validoinnin hyväksymisen kannalta. Saatujen tulosten perusteella validointi oli kokonaisuutena onnistunut ja tehdyn työn perusteella uusi menetelmä voidaan ottaa tulevaisuudessa käyttöön. Lopullinen käyttöönotto tapahtuu vuoden 2019 lopulla.
AB Enzymes suoritti uuden menetelmän optimoinnin Darmstadtin toimipisteessä Saksassa, ja sen todettiin soveltuvan vanhan menetelmän korvaajaksi. Myös uusi substraatti testattiin optimoinnin yhteydessä, ja vanha käytössä ollut Copenhagen X-2955-substraatti päätettiin vaihtaa uuteen Pectin-C-valmisteeseen.
Validointi toteutettiin optimoinnin tietojen pohjalta ja se suoritettiin neljällä erilaisella nestemäisellä entsyymivalmisteella, joiden aktiivisuustasot olivat toisistaan poikkeavia. Validoitaviksi parametreiksi valittiin menetelmän toistettavuus ja uusittavuus, joista laskettiin myös mittausepävarmuudet. Lisäksi menetelmän lineaarisuus tarkistettiin ja menetelmälle määritettiin toteamis- ja määritysraja.
Tulosten tarkastelussa keskityttiin pitkälti suhteellisten keskihajontojen tuloksiin, joiden tuli pysyä noin 10 prosentissa tai alle, jotta tuloksia voitiin pitää validoinnin osalta onnistuneina. Tämän osalta kaikki entsyymivalmisteet osoittivat menetelmän olevan luotettava. Lisäksi lineaarisuuden todettiin olevan hyvä.
Validoinnin aikana huomattiin suurehkoa absorbanssien hajontaa, joka osaltaan vaikutti mittausepävarmuuksiin. Mittausepävarmuudet eivät kuitenkaan olleet ratkaiseva tekijä validoinnin hyväksymisen kannalta. Saatujen tulosten perusteella validointi oli kokonaisuutena onnistunut ja tehdyn työn perusteella uusi menetelmä voidaan ottaa tulevaisuudessa käyttöön. Lopullinen käyttöönotto tapahtuu vuoden 2019 lopulla.