Localization and function of a mitochondrial Protein X
Veikkolainen, Matias (2015)
Veikkolainen, Matias
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2015
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2015120419517
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2015120419517
Tiivistelmä
Opinnäytetyön tutkimustyöt aloitettiin, jotta opittaisiin enemmän uudesta mitokondrio-proteiini X:stä, erityisesti sen sijainnista ja funktiosta mitokondriossa. Tutkimustyöt suoritettiin Biotekniikan instituutissa, Helsingin Viikissä, ja laboratoriotyöt suoritettiin osana Zhaon ryhmää.
Proteiini X:n sijainti selvitettiin käyttämällä Western blotia ja immunofluoresenssia. Oligomeerista tilaa soluissa tutkittiin natiivilla polyakryyliamidielektroforeesilla (BN-PAGE). Jotta proteiini X:n funktio soluissa selventyisi, käytettiin proteiini X:n siRNA:ta hiljentämään proteiini X:n solunsisäinen ekspressio. Immunofluoresennssia hyödyntäen havainnoitiin muutoksia mitokondrion morfologiassa.
Tutkimuksessa onnistuttiin havaitsemaan, että proteiini X sijaitsee ensisijaisesti mitokondriossa. Eristetyn mitokondrion proteaasi K digestiolla saatiin selville, että proteiini X on suurimmaksi osaksi lokalisoitunut mitokondrion sisäiseen membraaniin. BN-PAGE:lla tutkittiin proteiini X:n oligomeerista tilaa eristetyissä mitokondrioissa, ja tulokset osoittivat, että U-2 OS soluissa proteiini X on monomeeri. Proteiini X:n siRNA -hiljennyksellä saatiin selville, että mitokondrion morfologia muuttui putkimaisesta fragmentoituneeksi ja turvonneeksi rakenteeksi.
Tutkimus osoitti, että proteiini X on lokalisoitunut mitokondrion sisälle ja sillä on elintärkeä funktio mitokondrion normaalin rakenteen morfologiassa. Tulokset ovat tärkeitä mitokondrion funktion ymmärtämiseksi, sillä sen ymmärtämisellä on potentiaalia paljastaa uusia terapeuttisia menetelmiä mitokondrio-proteiinien aiheuttamien toimintahäiriöiden parantamiseksi.
Proteiini X:n sijainti selvitettiin käyttämällä Western blotia ja immunofluoresenssia. Oligomeerista tilaa soluissa tutkittiin natiivilla polyakryyliamidielektroforeesilla (BN-PAGE). Jotta proteiini X:n funktio soluissa selventyisi, käytettiin proteiini X:n siRNA:ta hiljentämään proteiini X:n solunsisäinen ekspressio. Immunofluoresennssia hyödyntäen havainnoitiin muutoksia mitokondrion morfologiassa.
Tutkimuksessa onnistuttiin havaitsemaan, että proteiini X sijaitsee ensisijaisesti mitokondriossa. Eristetyn mitokondrion proteaasi K digestiolla saatiin selville, että proteiini X on suurimmaksi osaksi lokalisoitunut mitokondrion sisäiseen membraaniin. BN-PAGE:lla tutkittiin proteiini X:n oligomeerista tilaa eristetyissä mitokondrioissa, ja tulokset osoittivat, että U-2 OS soluissa proteiini X on monomeeri. Proteiini X:n siRNA -hiljennyksellä saatiin selville, että mitokondrion morfologia muuttui putkimaisesta fragmentoituneeksi ja turvonneeksi rakenteeksi.
Tutkimus osoitti, että proteiini X on lokalisoitunut mitokondrion sisälle ja sillä on elintärkeä funktio mitokondrion normaalin rakenteen morfologiassa. Tulokset ovat tärkeitä mitokondrion funktion ymmärtämiseksi, sillä sen ymmärtämisellä on potentiaalia paljastaa uusia terapeuttisia menetelmiä mitokondrio-proteiinien aiheuttamien toimintahäiriöiden parantamiseksi.