Poistogeenisen Escherichia coli -kannan luominen P1-bakteriofagi menetelmällä
Moilanen, Ville (2011)
Moilanen, Ville
Oulun seudun ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201105096805
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201105096805
Tiivistelmä
Työn aiheena on poistogeenisen Escherichia coli -kannan luominen
molekyylibiologian tarpeisiin käyttäen P1-bakteriofagimenetelmää. Tavoitteena
oli kehittää toistettava ja suoraviivainen menetelmä poistogeenisen bakteerin
luomiseen käyttäen P1-bakteriofagia transduktiossa.
Työssä käytettiin perinteisiä mikrobiologian ja geenitekniikan menetelmiä
kohdebakteerin kasvatuksessa, sekä geneettisen materiaalin monistamisessa,
puhdistamisessa ja varmentamisessa. P1-bakteriofagimenetelmän kehittäminen
aloitettiin kokeilemalla ja kehittämällä jo olemassa olevia P1-menetelmiä. Näitä
menetelmiä toistettiin ja käytäntöjä muutettiin saatujen tulosten mukaisesti.
Työn tuloksena kehitettiin toistettava menetelmä, joka perustuu bakteriofagi
P1:den kykyyn toimia transduktiopartikkelina ja siirtää geneettistä materiaalia
isäntäsolusta toiseen. Halutun geenin siirtämiseen tarvitaan riittävän suuri
populaatio P1-fageja. Koska geneettisen materiaalin pakkaaminen
muodostuviin uusiin fageihin on sattumanvaraista, on fagi-populaation oltava
riittävän suuri kattamaan isäntäbakteerin perintöaineksen.
molekyylibiologian tarpeisiin käyttäen P1-bakteriofagimenetelmää. Tavoitteena
oli kehittää toistettava ja suoraviivainen menetelmä poistogeenisen bakteerin
luomiseen käyttäen P1-bakteriofagia transduktiossa.
Työssä käytettiin perinteisiä mikrobiologian ja geenitekniikan menetelmiä
kohdebakteerin kasvatuksessa, sekä geneettisen materiaalin monistamisessa,
puhdistamisessa ja varmentamisessa. P1-bakteriofagimenetelmän kehittäminen
aloitettiin kokeilemalla ja kehittämällä jo olemassa olevia P1-menetelmiä. Näitä
menetelmiä toistettiin ja käytäntöjä muutettiin saatujen tulosten mukaisesti.
Työn tuloksena kehitettiin toistettava menetelmä, joka perustuu bakteriofagi
P1:den kykyyn toimia transduktiopartikkelina ja siirtää geneettistä materiaalia
isäntäsolusta toiseen. Halutun geenin siirtämiseen tarvitaan riittävän suuri
populaatio P1-fageja. Koska geneettisen materiaalin pakkaaminen
muodostuviin uusiin fageihin on sattumanvaraista, on fagi-populaation oltava
riittävän suuri kattamaan isäntäbakteerin perintöaineksen.