Karakterisering av Notch1 fosforylering under replikationsstress
Suhonen, Emma (2021)
Tässä tietueessa ei ole tiedostoja, ainoastaan metadata.
Suhonen, Emma
2021
All rights reserved. This publication is copyrighted. You may download, display and print it for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2021072641727
https://urn.fi/URN:NBN:fi-fe2021072641727
Tiivistelmä
Notch1 har en betydande roll i många av cellens funktioner. Tidigare studier visar att Notch deltar i regleringen av ATM/ATR-aktiveringen vid replikationsstress genom att binda till ATM, vilket inhiberar autofosforyleringen av ATM och därav aktiveringen av proteinet. Aktiveringen av ATM/ATR-kinaserna är avgörande vid responsen för DNA-skada och är viktig för reparering av dubbelsträngsskador. Signaleringsräckan är ofta muterad i cancer eftersom cancercellerna vill kunna kringgå apoptossignaleringen och på så sätt föra vidare mutationer.
Avhandlingens syfte är att karakterisera ATM/ATR-medierad fosforylering av Notch1 under replikationsstress genom att mutera potentiella fosforyleringsställen på Notch1 och analysera dem i bröstcancerceller. I analysen utnyttjades metoder som Western blot, immunoprecipitering och immunofluorescensfärgning.
Det här arbetet visar att Notch1 är viktig för en korrekt initiering av responsen för
replikationsstress, eftersom frånvaro av Notch1 påverkade nivåer av fosforylerad RPA och γ-H2AX. Immunoprecipitering visade att Notch1 är ett substrat för ATM/ATRmedierad fosforylering och genom analys med inhibitorer för ATM och ATR framkom det att både ATM och ATR fosforylerar Notch1 men att ATR ansvarar primärt för fosforyleringen under replikationsstress. Det är ännu oklart hur ATM/ATR-medierade fosforyleringen av Notch1 påverkar cellerna och deras respons till DNA-skador. Fosforyleringen sker mest sannolikt på flera ställen, men ett potentiellt ställe är S2311 i TAD-domänen.
Avhandlingens syfte är att karakterisera ATM/ATR-medierad fosforylering av Notch1 under replikationsstress genom att mutera potentiella fosforyleringsställen på Notch1 och analysera dem i bröstcancerceller. I analysen utnyttjades metoder som Western blot, immunoprecipitering och immunofluorescensfärgning.
Det här arbetet visar att Notch1 är viktig för en korrekt initiering av responsen för
replikationsstress, eftersom frånvaro av Notch1 påverkade nivåer av fosforylerad RPA och γ-H2AX. Immunoprecipitering visade att Notch1 är ett substrat för ATM/ATRmedierad fosforylering och genom analys med inhibitorer för ATM och ATR framkom det att både ATM och ATR fosforylerar Notch1 men att ATR ansvarar primärt för fosforyleringen under replikationsstress. Det är ännu oklart hur ATM/ATR-medierade fosforyleringen av Notch1 påverkar cellerna och deras respons till DNA-skador. Fosforyleringen sker mest sannolikt på flera ställen, men ett potentiellt ställe är S2311 i TAD-domänen.