(U)HPLC-MS/MS käyttö virtsanäytteiden steroidianalyyseissä
Käsmä, Salla (2019-01-10)
Käsmä, Salla
S. Käsmä
10.01.2019
© 2019 Salla Käsmä. Tämä Kohde on tekijänoikeuden ja/tai lähioikeuksien suojaama. Voit käyttää Kohdetta käyttöösi sovellettavan tekijänoikeutta ja lähioikeuksia koskevan lainsäädännön sallimilla tavoilla. Muunlaista käyttöä varten tarvitset oikeudenhaltijoiden luvan.
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:oulu-201901121055
https://urn.fi/URN:NBN:fi:oulu-201901121055
Tiivistelmä
Kehossa esiintyy luontaisesti useita anabolisia androgeenisia steroidiyhdisteitä, joista lihasmassan kasvun ja sen ylläpidon kannalta merkittävin on testosteroni. Testosteronin voimakkaan anabolisen vaikutuksen takia siitä on tehty useita muunnelma, joilla on pyritty minimoimaan androgeenista vaikutusta, maksimoimaan anabolista tehoa ja esimerkiksi vaikuttamaan yhdisteen vapautumiseen kehossa. Luontaisetja synteettiset anaboliset androgeenit ovat sekä rakenteeltaan että toiminnaltaan testosteronin kaltaisia. Anabolisten androgeenien ja muiden steroidiyhdisteiden aineenvaihdunta on monimutkaista, sisältäen useita entsyymiavusteisia reaktioita, minkä johdosta steroidiyhdisteiden analysointi voi olla haastavaa ja tiettyä yhdistettä voidaan tutkia suoraan tai useiden eri markkerien tai metaboliittien avulla.
Steroidiyhdisteiden analytiikassa aineenvaihdunta huomioidaan näytteenkäsittelyssä. Virtsan sisältämät steroidit ovat suurilta osin glukuronidikonjugaatteja, joiden lisäksi virtsassa esiintyy sulfaattikonjugaatteja ja muita aineenvaihduntatuotteita. Näytteenkäsittelyssä glukuronidikonjugaatit yleensä hydrolysoidaan takaisin vapaaseen steroidimuotoon ja näytteet uutetaan poolittomien ja poolisten yhdisteiden erottamiseksi. Laitekomponenttien ja menetelmän kehittyminen on mahdollistanut myös suoraruiskutusmenetelmän soveltamisen.
Steroideja voidaan analysoida virtsasta perinteisen kaasukromatografia-massaspektrometrin lisäksi mm. korkean erotuskyvyn nestekromatografialla kytkettynä tandem massaspektrometriin. Menetelmää voidaan käyttää sekä kvantitatiivisiin että kvalitatiivisiin analyyseihin ja sen etu on lämpöherkkien yhdisteiden analysointi, herkkyys ja automaation helppous. Steroidianalyyseissä nestekromatografisessa erotuksessa käytetään yleisimmin käänteisfaasierotusta ja gradienttimenetelmää. Ionisointi suoritetaan sähkösumutusionisaatiolla tai kemiallisella ionisaatiolla normaali ilmanpaineessa, sillä kyseiset ionisaatiomenetelmät aiheuttavat vähän fragmentaatiota. Massa-analysaattorina käytetään yleisimmin kolmoiskvadrupolia, mutta myös ioniloukku- ja lentoaika-analysaattoreita yhdistettynä kvadrupoliin.
Korkean erotuskyvyn nestekromatografia kytkettynä tandem massaspektrometriin sisältää useita eri muuttujia, joita vaihtelemalla, säätämällä ja optimoimalla voidaan vaikuttaa analyysituloksiin. Menetelmän erilaisten mahdollisuuksien määrä mahdollistaa lukuisten erilaisten yhdisteiden analysoinnin ja menetelmän edelleen kehittymisen.
Steroidiyhdisteiden analytiikassa aineenvaihdunta huomioidaan näytteenkäsittelyssä. Virtsan sisältämät steroidit ovat suurilta osin glukuronidikonjugaatteja, joiden lisäksi virtsassa esiintyy sulfaattikonjugaatteja ja muita aineenvaihduntatuotteita. Näytteenkäsittelyssä glukuronidikonjugaatit yleensä hydrolysoidaan takaisin vapaaseen steroidimuotoon ja näytteet uutetaan poolittomien ja poolisten yhdisteiden erottamiseksi. Laitekomponenttien ja menetelmän kehittyminen on mahdollistanut myös suoraruiskutusmenetelmän soveltamisen.
Steroideja voidaan analysoida virtsasta perinteisen kaasukromatografia-massaspektrometrin lisäksi mm. korkean erotuskyvyn nestekromatografialla kytkettynä tandem massaspektrometriin. Menetelmää voidaan käyttää sekä kvantitatiivisiin että kvalitatiivisiin analyyseihin ja sen etu on lämpöherkkien yhdisteiden analysointi, herkkyys ja automaation helppous. Steroidianalyyseissä nestekromatografisessa erotuksessa käytetään yleisimmin käänteisfaasierotusta ja gradienttimenetelmää. Ionisointi suoritetaan sähkösumutusionisaatiolla tai kemiallisella ionisaatiolla normaali ilmanpaineessa, sillä kyseiset ionisaatiomenetelmät aiheuttavat vähän fragmentaatiota. Massa-analysaattorina käytetään yleisimmin kolmoiskvadrupolia, mutta myös ioniloukku- ja lentoaika-analysaattoreita yhdistettynä kvadrupoliin.
Korkean erotuskyvyn nestekromatografia kytkettynä tandem massaspektrometriin sisältää useita eri muuttujia, joita vaihtelemalla, säätämällä ja optimoimalla voidaan vaikuttaa analyysituloksiin. Menetelmän erilaisten mahdollisuuksien määrä mahdollistaa lukuisten erilaisten yhdisteiden analysoinnin ja menetelmän edelleen kehittymisen.
Kokoelmat
- Avoin saatavuus [32009]