HSD17β1-inhibiittoreiden seulontamenetelmän kehitys
Porkka, Jasmin (2016)
Porkka, Jasmin
Turun ammattikorkeakoulu
2016
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605117087
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201605117087
Tiivistelmä
Entsyymit ovat biomolekyylejä, jotka kiihdyttävät kemiallisia reaktioita. Ne ovat tyypillisesti proteiineja, joilla on uniikki kolmiulotteinen rakenne. Inhibiittorit ovat aineita, joilla entsyymien toiminta voidaan estää. Useat lääkkeet ovat erilaisten entsyymien inhibiittoreita, mistä syystä uusien lääkeaineiden löytäminen ja kehittäminen ovat aktiivisia farmakologian ja biokemian tutkimusalueita.
Hydroksisteroidi (17-beta) dehydrogenaasi tyyppi 1 -entsyymi (HSD17β1) osallistuu steroidibiosynteesin vaiheeseen, jossa heikosta estrogeenistä, estronista, muodostuu bioaktiivista estrogeeniä, estradiolia. HSD17β1-entsyymi ilmenee useissa estrogeeniriippuvaisissa tautikudoksissa, kuten rintasyöpä- sekä endometrioosikudoksessa, jossa estradiolin tiedetään olevan voimakas kasvutekijä. HSD17β1-entsyymin inhibitiota on tutkittu laajalti, ja sen on todettu olevan mahdollinen uusi hoitomuoto estrogeeniriippuvaisille sairauksille.
Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää seulontamenetelmä HSD17β1-entsyymin inhibiittoreille, jolla voidaan tutkia pienmolekyylisten lääkeainekandidaattien kykyä inhiboida HSD17β1-entsyymiä. Menetelmän kehityksessä käytettiin hyväksi Forendo Pharmassa aikaisemmin kehitettyjä, sekä julkaisuista etsittyjä seulontamenetelmiä. Uuden HSD17β1-entsyymin inhibiittoreiden seulontamenetelmän kehityksessä optimoitiin entsyymin aktiivisuuteen vaikuttavat parametrit; entsyymipitoisuus, rektiopuskurin pH, substraattipitoisuus, kofaktori-pitoisuus sekä inkubointilämpötila.
HSD17β1-entsyyminä käytettiin Escherichia coli -bakteerissa tuotettua entsyymiä. Testit suoritettiin lääkeaineseulontaan sopivassa 96-kuoppalevyformaatissa. Testeissä estronin konversiota estradioliksi mitattiin Watersin HPLC-laitteella sekä Packardin Radiomatic -leimalaskindetektorilla.
Opinnäytetyön tavoitteet toteutuivat, sillä uuden HSD17β1-inhibiittoreiden lääkeseulontamenetelmän kehitys onnistui. Menetelmän toimivuus varmistettiin tunnetulla HSD17β1-inhibiittorilla ja kahdella uudella lääkeainekandidaatilla.
Hydroksisteroidi (17-beta) dehydrogenaasi tyyppi 1 -entsyymi (HSD17β1) osallistuu steroidibiosynteesin vaiheeseen, jossa heikosta estrogeenistä, estronista, muodostuu bioaktiivista estrogeeniä, estradiolia. HSD17β1-entsyymi ilmenee useissa estrogeeniriippuvaisissa tautikudoksissa, kuten rintasyöpä- sekä endometrioosikudoksessa, jossa estradiolin tiedetään olevan voimakas kasvutekijä. HSD17β1-entsyymin inhibitiota on tutkittu laajalti, ja sen on todettu olevan mahdollinen uusi hoitomuoto estrogeeniriippuvaisille sairauksille.
Opinnäytetyön tavoitteena oli kehittää seulontamenetelmä HSD17β1-entsyymin inhibiittoreille, jolla voidaan tutkia pienmolekyylisten lääkeainekandidaattien kykyä inhiboida HSD17β1-entsyymiä. Menetelmän kehityksessä käytettiin hyväksi Forendo Pharmassa aikaisemmin kehitettyjä, sekä julkaisuista etsittyjä seulontamenetelmiä. Uuden HSD17β1-entsyymin inhibiittoreiden seulontamenetelmän kehityksessä optimoitiin entsyymin aktiivisuuteen vaikuttavat parametrit; entsyymipitoisuus, rektiopuskurin pH, substraattipitoisuus, kofaktori-pitoisuus sekä inkubointilämpötila.
HSD17β1-entsyyminä käytettiin Escherichia coli -bakteerissa tuotettua entsyymiä. Testit suoritettiin lääkeaineseulontaan sopivassa 96-kuoppalevyformaatissa. Testeissä estronin konversiota estradioliksi mitattiin Watersin HPLC-laitteella sekä Packardin Radiomatic -leimalaskindetektorilla.
Opinnäytetyön tavoitteet toteutuivat, sillä uuden HSD17β1-inhibiittoreiden lääkeseulontamenetelmän kehitys onnistui. Menetelmän toimivuus varmistettiin tunnetulla HSD17β1-inhibiittorilla ja kahdella uudella lääkeainekandidaatilla.