CYP19A1-geenin ilmentyminen hARO-Luc-hiirillä rasvakudoksissa ja mesenkymaalisissa stroomasoluissa : menetelmän optimointi
Kivistö, Jaana (2014)
Kivistö, Jaana
Turun ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014121820334
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014121820334
Tiivistelmä
Tämän opinnäytetyön tarkoitus oli optimoida menetelmää, jota käytetään Turun yliopiston Biolääketieteen laitoksella Funktionaalisten elintarvikkeiden kehittämiskeskuksessa lusiferaasiaktiivisuuden määrittämiseen transgeenisten hARO-Luc –hiirten rasvakudoksesta ja mesenkymaalisista stroomasoluista. hARO-Luc-hiirimallissa on siirrettynä lusiferaasireportteri-geeniin yhdistetty ihmisen CYP19A1-geenin säätelyalue. hARO-Luc-hiirimallissa normaalin aromataasientsyymin tuotannon sijasta tuotetaan lusiferaasia. Geenin ilmentyminen voidaan siten määrittää lusiferaasiaktiivisuutta mittaamalla.
CYP19A1-geeni säätelee aromataasientsyymin tuotantoa sekä gonadeissa (kiveksissä ja munasarjoissa) että rasvakudoksessa ja muissa perifeerisissä kudoksissa. Aromataasientsyymi toimii osana estrogeenin tuotantoa. Erityisesti postmenopausaalisilla naisilla aromataasin ilmentymisen ja estrogeenin tuotannon nousun rintojen rasvakudoksissa on todettu esiintyvän rintasyövän kanssa samoilla alueilla.
Menetelmän optimointiin kuului hARO-Luc –hiiriltä kerättyjen maitorauhasten- ja gonadaalisten alueiden rasvakudoksien sekä reisi- ja sääriluiden luuytimien mesenkymaalisten stroomasolujen altistaminen 250 nM deksametasoni- ja 5 ng/ml TNFα-hoidoille sekä inkubaatioajan testaaminen 24:n, 48:n, 72 tunnin sekä 7 päivän jälkeen hoidoille altistamisesta. Rasvakudoksista ja mesenkymaalisista stroomasoluista analysoitiin lusiferaasiaktiivisuutta kaupallista määritysmenetelmää käyttäen.
Optimaaliseksi hoitojen inkubaatioajaksi määritettiin 24 tunnin inkubaatioaika sekä rasvakudoksille että mesenkymaalisille stroomasoluille.
CYP19A1-geeni säätelee aromataasientsyymin tuotantoa sekä gonadeissa (kiveksissä ja munasarjoissa) että rasvakudoksessa ja muissa perifeerisissä kudoksissa. Aromataasientsyymi toimii osana estrogeenin tuotantoa. Erityisesti postmenopausaalisilla naisilla aromataasin ilmentymisen ja estrogeenin tuotannon nousun rintojen rasvakudoksissa on todettu esiintyvän rintasyövän kanssa samoilla alueilla.
Menetelmän optimointiin kuului hARO-Luc –hiiriltä kerättyjen maitorauhasten- ja gonadaalisten alueiden rasvakudoksien sekä reisi- ja sääriluiden luuytimien mesenkymaalisten stroomasolujen altistaminen 250 nM deksametasoni- ja 5 ng/ml TNFα-hoidoille sekä inkubaatioajan testaaminen 24:n, 48:n, 72 tunnin sekä 7 päivän jälkeen hoidoille altistamisesta. Rasvakudoksista ja mesenkymaalisista stroomasoluista analysoitiin lusiferaasiaktiivisuutta kaupallista määritysmenetelmää käyttäen.
Optimaaliseksi hoitojen inkubaatioajaksi määritettiin 24 tunnin inkubaatioaika sekä rasvakudoksille että mesenkymaalisille stroomasoluille.