Seerumin korvikkeen konsentraation vaikutus RPE-erilaistuksessa
Kuusisto, Sirja (2014)
Kuusisto, Sirja
Tampereen ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014121620067
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014121620067
Tiivistelmä
Pluripotentit kantasolut pystyvät erilaistumaan kaikiksi aikuisen yksilön solutyypeiksi. Tämän ominaisuuden vuoksi niiden käyttöä pidetään lupaavana hoitokeinona erilaisten sairauksien hoidossa. Silmän verkkokalvon ikärappeuma on yleisin sokeutta aiheuttava tauti. Pluripotenteista kantasoluista erilaistetut verkkokalvon pigmenttiepiteelisolut (RPE-solut) saattavat tulevaisuudessa toimia solusiirteinä taudin hoitokeinona. Erilaistukselle täytyy kuitenkin löytää optimaaliset olosuhteet ilman eläinperäisiä tuotteita.
Erilaistus voidaan tehdä spontaanisti poistamalla kasvutekijät tai ohjaamalla sitä erilaisten kasvutekijöiden avulla. Pluripotenttien kantasolujen kasvatukseen käytetty kasvatusliuos on muuten sama kuin spontaaniin erilaistukseen käytetty kasvatusliuos, mutta siitä on poistettu erilaistumista estävä kasvutekijä.
Tässä tutkimuksessa vertailtiin kasvatusliuoksen sisältämän seerumin korvikkeen konsentraation vaikutusta spontaanissa RPE erilaistuksessa. Seerumin korvike on kallis reagenssi, joten sen määrän mahdollinen vähennys auttaisi laskemaan solujen ylläpitokustannuksia. Tutkimuksessa käytettiin tutkimusryhmän itse pystyttämää alkion kantasolulinjaa ja lahjoituksena Timo Otonkosken ryhmältä saatua indusoitua pluripotenttia kantasolulinjaa. Solujen kehitystä ja erilaistumista seurattiin silmämääräisesti tarkkaillen ja kypsät solut karakterisoitiin. Silmämääräisesti tarkkailtiin melaniinipigmentin ilmestymistä. Eri karakterisointimenetelmillä tahdottiin tutkia ovatko solut erilaistuneet RPE-solujen kaltaisiksi. Pigmentoituneiden solujen määrää kvantitoitiin, solujen morfologiaa arvioitiin ja soluista tutkittiin RPE-spesifejä geenejä: MITF, Bestrophin-1, TYR ja RPE65 ja proteiineja: Bestrophin-1 ja MITF.
Kaikilla tutkituilla seerumin korvikekonsentraatioilla saatiin kasvatettua kypsiä RPE-solujen kaltaisia soluja. Tuloksista ei käynyt yksiselitteisesti ilmi paras konsentraatio. Silmämääräisesti tulokset vaikuttivat kuitenkin heikommilta pienillä pitoisuuksilla. Aihetta on siis hyvä tutkia lisää optimaalisen pitoisuuden selvittämiseksi.
Erilaistus voidaan tehdä spontaanisti poistamalla kasvutekijät tai ohjaamalla sitä erilaisten kasvutekijöiden avulla. Pluripotenttien kantasolujen kasvatukseen käytetty kasvatusliuos on muuten sama kuin spontaaniin erilaistukseen käytetty kasvatusliuos, mutta siitä on poistettu erilaistumista estävä kasvutekijä.
Tässä tutkimuksessa vertailtiin kasvatusliuoksen sisältämän seerumin korvikkeen konsentraation vaikutusta spontaanissa RPE erilaistuksessa. Seerumin korvike on kallis reagenssi, joten sen määrän mahdollinen vähennys auttaisi laskemaan solujen ylläpitokustannuksia. Tutkimuksessa käytettiin tutkimusryhmän itse pystyttämää alkion kantasolulinjaa ja lahjoituksena Timo Otonkosken ryhmältä saatua indusoitua pluripotenttia kantasolulinjaa. Solujen kehitystä ja erilaistumista seurattiin silmämääräisesti tarkkaillen ja kypsät solut karakterisoitiin. Silmämääräisesti tarkkailtiin melaniinipigmentin ilmestymistä. Eri karakterisointimenetelmillä tahdottiin tutkia ovatko solut erilaistuneet RPE-solujen kaltaisiksi. Pigmentoituneiden solujen määrää kvantitoitiin, solujen morfologiaa arvioitiin ja soluista tutkittiin RPE-spesifejä geenejä: MITF, Bestrophin-1, TYR ja RPE65 ja proteiineja: Bestrophin-1 ja MITF.
Kaikilla tutkituilla seerumin korvikekonsentraatioilla saatiin kasvatettua kypsiä RPE-solujen kaltaisia soluja. Tuloksista ei käynyt yksiselitteisesti ilmi paras konsentraatio. Silmämääräisesti tulokset vaikuttivat kuitenkin heikommilta pienillä pitoisuuksilla. Aihetta on siis hyvä tutkia lisää optimaalisen pitoisuuden selvittämiseksi.