Palsamin kuoliolaikkuviruksen määrittäminen : Kaupallisten ELISA-testien vertailu
Kumlander, Noora (2014)
Kumlander, Noora
Tampereen ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014120418486
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2014120418486
Tiivistelmä
Palsamin kuoliolaikkuvirus (INSV) on kasvipatogeeni, joka aiheuttaa tautia sadoissa kasvilajeissa. Vaaralliseksi kasvintuhoojaksi luokiteltu virus leviää saastuneiden kasvien ja ripsiäisten välityksellä aiheuttaen tyypillisesti kasvin lehtiin selkeärajaisia, renkaanmuotoisia laikkuja. Maailmanlaajuisesti levinnyttä palsamin kuoliolaikkuvirusta tavataan luonnossa useimmiten trooppisilla ja subtrooppisilla kasvillisuusvyöhykkeillä, mutta myös avomailla lauhkealla vyöhykkeellä. Viileällä vyöhykkeellä, kuten Suomessa, virusta esiintyy lähinnä kasvihuoneviljelmillä. Palsamin kuoliolaikkuviruksen torjunta perustuu ennaltaehkäisyyn, koska taudin toteamisen jälkeen siirtäjät ja taudinaiheuttaja hävitetään. Ilman torjuntatoimia viruksen leviäminen voi johtaa merkittäviin sadonmenetyksiin.
ELISA on immunologinen määritysmenetelmä, joka perustuu antigeenin ja sille spesifisen vasta-aineen sitoutumiseen. Kiinteälle pinnalle sidottuun antigeeniin sitoutuu vasta-aine, joka on yleensä entsyymillä leimattu. Vasta-aineessa kemiallisilla sidoksilla kiinni oleva entsyymi reagoi substraatin kanssa muodostaen värillisen lopputuotteen, jonka intensiteetti voidaan mitata spektrofotometrisesti. Menetelmä on suosittu sen helppouden, tarkkuuden ja alhaisten kustannusten vuoksi. Lisäksi se mahdollistaa usean näytteen samanaikaisen määrittämisen nopeasti, eikä testin suorittamiseen vaadita erikoisvälineistöä.
Opinnäytetyö tehtiin Elintarviketurvallisuusvirasto Evirassa, ja sen tavoitteena oli saada Kasvintuhoojajaostossa nykyisin käytössä olevan kaupallisen ELISA-kitin rinnalle toinen kaupallinen testikitti, jolla olisi mahdollista määrittää palsamin kuoliolaikkuvirusta. Testiä voitaisiin käyttää epäselvien tai heikkojen positiivisten tulosten varmistamisessa. Työn tarkoituksena oli vertailla neljää kaupallista ELISA-testikittiä, joiden valmistajat olivat Loewe, Agdia, DSMZ ja PRI.
Tutkimuksen perusteella havaittiin DSMZ:n ELISA-testin sopivan Kasvintuhoojajaoston rutiinikäyttöön palsamin kuoliolaikkuviruksen määrittämisessä. Testi oli käytännöllinen ja helposti suoritettava sekä saatujen tulosten perusteella se todettiin luotettavaksi viruksen määrittämisessä.
ELISA on immunologinen määritysmenetelmä, joka perustuu antigeenin ja sille spesifisen vasta-aineen sitoutumiseen. Kiinteälle pinnalle sidottuun antigeeniin sitoutuu vasta-aine, joka on yleensä entsyymillä leimattu. Vasta-aineessa kemiallisilla sidoksilla kiinni oleva entsyymi reagoi substraatin kanssa muodostaen värillisen lopputuotteen, jonka intensiteetti voidaan mitata spektrofotometrisesti. Menetelmä on suosittu sen helppouden, tarkkuuden ja alhaisten kustannusten vuoksi. Lisäksi se mahdollistaa usean näytteen samanaikaisen määrittämisen nopeasti, eikä testin suorittamiseen vaadita erikoisvälineistöä.
Opinnäytetyö tehtiin Elintarviketurvallisuusvirasto Evirassa, ja sen tavoitteena oli saada Kasvintuhoojajaostossa nykyisin käytössä olevan kaupallisen ELISA-kitin rinnalle toinen kaupallinen testikitti, jolla olisi mahdollista määrittää palsamin kuoliolaikkuvirusta. Testiä voitaisiin käyttää epäselvien tai heikkojen positiivisten tulosten varmistamisessa. Työn tarkoituksena oli vertailla neljää kaupallista ELISA-testikittiä, joiden valmistajat olivat Loewe, Agdia, DSMZ ja PRI.
Tutkimuksen perusteella havaittiin DSMZ:n ELISA-testin sopivan Kasvintuhoojajaoston rutiinikäyttöön palsamin kuoliolaikkuviruksen määrittämisessä. Testi oli käytännöllinen ja helposti suoritettava sekä saatujen tulosten perusteella se todettiin luotettavaksi viruksen määrittämisessä.