Minkin Aleutian taudin ELISA-testin tuotteistaminen : Insinöörityö
Poikulainen, Emmi (2014)
Poikulainen, Emmi
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405157980
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405157980
Tiivistelmä
Aleutian tauti on minkin (Mustela vison) plasmasytoosisairaus. Sen aiheuttaa Aleutian mink disease virus, AMDV, joka on parvovirus. AMDV:n käyttäytyminen on kuitenkin epätyypillistä parvoviruksille. Taudin oireita ovat hypergammaglobulanemia, hengitystieinfektiot ja muut tulehdukset. Tauti on merkittävä, sillä siihen ei ole olemassa käypää hoitoa tai rokotetta, ja se aiheuttaa suuria taloudellisia vahinkoja kaikissa minkin kasvattajamaissa.
Ainoa tapa ehkäistä Aleutian taudin tuhoja on kansallinen seulontaohjelma, jolla sairaat eläimet tunnistetaan. Testejä tehdään Suomessakin vuosittain satojatuhansia. Aiemmat diagnostiset testit ovat olleet joko epäkäytännöllisiä tai kalliita. Olisikin tarpeen saada aikaan vakioitu, kaupallinen ja helppo testi Aleutian taudille.
Tässä työssä tuotteistettiin Aleutian taudin osoittamiseen kehitettyä ELISA-testiä, joka perustuu AMDV:n VP2-rakenneproteiiniin ja sen tunnistavan minkin IgG-vasta-aineen määritykseen.
Työn aikana tutkittiin erilaisia kouttausolosuhteita. Tarkoituksena oli löytää sellaiset kouttauspuskurit ja antigeenin ja konjugaatin pitoisuudet, joilla testille asetetut kontrollinäytteiden arvot saataisiin toivottuihin rajoihin. Lisäksi tutkittiin blokkausliuosten vaikutusta kouttaukseen, absorbanssitasoon ja tasaisuuteen. Tutkittiin myös laimennospuskurin vaikutusta kontrollinäytteiden tuloksiin ja säilyvyyteen.
Optimoinnin tuloksena löydettiin levy, jonka tulokset kontrollinäytteille ja minkin verinäytteille olivat määritellyissä rajoissa. Levyn sisäinen tasaisuus testattiin ja todettiin hyväksi. Myös kouttaus- ja testauskertojen välisiä eroja testattiin ja tulokset olivat tasaisia. Kontrollinäytteille ja konjugaatille löydettiin toimivat puskurit.
Projektin seuraavassa vaiheessa keskitytään levyn säilyvyystesteihin.
Ainoa tapa ehkäistä Aleutian taudin tuhoja on kansallinen seulontaohjelma, jolla sairaat eläimet tunnistetaan. Testejä tehdään Suomessakin vuosittain satojatuhansia. Aiemmat diagnostiset testit ovat olleet joko epäkäytännöllisiä tai kalliita. Olisikin tarpeen saada aikaan vakioitu, kaupallinen ja helppo testi Aleutian taudille.
Tässä työssä tuotteistettiin Aleutian taudin osoittamiseen kehitettyä ELISA-testiä, joka perustuu AMDV:n VP2-rakenneproteiiniin ja sen tunnistavan minkin IgG-vasta-aineen määritykseen.
Työn aikana tutkittiin erilaisia kouttausolosuhteita. Tarkoituksena oli löytää sellaiset kouttauspuskurit ja antigeenin ja konjugaatin pitoisuudet, joilla testille asetetut kontrollinäytteiden arvot saataisiin toivottuihin rajoihin. Lisäksi tutkittiin blokkausliuosten vaikutusta kouttaukseen, absorbanssitasoon ja tasaisuuteen. Tutkittiin myös laimennospuskurin vaikutusta kontrollinäytteiden tuloksiin ja säilyvyyteen.
Optimoinnin tuloksena löydettiin levy, jonka tulokset kontrollinäytteille ja minkin verinäytteille olivat määritellyissä rajoissa. Levyn sisäinen tasaisuus testattiin ja todettiin hyväksi. Myös kouttaus- ja testauskertojen välisiä eroja testattiin ja tulokset olivat tasaisia. Kontrollinäytteille ja konjugaatille löydettiin toimivat puskurit.
Projektin seuraavassa vaiheessa keskitytään levyn säilyvyystesteihin.