CAR- JA PXR -tumareseptorien kloonaaminen eri lajeista ja niiden toiminnan tutkiminen
Pakanen, Anni-Maaria (2014)
Pakanen, Anni-Maaria
Savonia-ammattikorkeakoulu
2014
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405055837
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201405055837
Tiivistelmä
Tumareseptorien rakennetta ja toimintaa tutkimalla voidaan saada tietoa reseptorien toiminnan kannalta tärkeistä aminohapoista ja lisätietoa niiden evoluutiosta. Tiedon avulla voitaisiin myös selittää lääkkeiden vaikutusten välisiä yksilö- ja lajieroja, kehittää uusia lääkeaineita sekä vähentää lääkeaineiden välisiä yhteisvaikutuksia. LBD-alueen tutkiminen on erityisen tärkeää, koska tumareseptorin aktivoituminen tapahtuu yleensä ligandin sitouduttua siihen. Näiden tumareseptorien ligandina voi toimia esimerkiksi jokin lääkeaine.
Molekyylibiologian ja geenitekniikan osa-alueita sisältävä opinnäytetyö toteutettiin Itä-Suomen yliopiston Farmasian laitoksella. Työ koostui kahdesta erillisestä osiosta: CAR- ja PXR-tumareseptorien ligandia sitovien domeenien (engl. LBD) kloonaamisesta eri lajeista sekä naudan promoottorialueiden reportterigeenimittauksesta. Reportterigeenimittaus oli osa professori Paavo Honkakosken sekä Padovan yliopiston yhteistyönä toteutettavaa tutkimusta. Opinnäytetyön tavoitteena oli kloonata eri lajeista CAR:n ja PXR:n LBD-alueita ja selvittää niiden sekvenssit. Kloo-naustyön epäonnistuttua työtä jatkettiin tutkimalla näiden tumareseptorien promoottorialueita reportterigeenimittauksella. Työssä testattiin CAR:n ja PXR:n vaikutusta seitsemän erilaisen naudan promoottorialueen aktiivisuuteen.
LBD-alueiden kloonaaminen ei onnistunut optimoinnista huolimatta. Reportterigeenimittauksen tulosten perusteella löydettiin kaksi promoottorialuetta, joiden aktiivisuutta molemmat tumareseptorit lisäsivät sekä yksi alue, jonka aktiivisuutta tumareseptorit vähensivät. Tulokset olivat yhteneväisiä molemmilla mittauskerroilla, mutta ne ovat kuitenkin vasta alustavia ja ne täytyy varmistaa uusintamittauksilla.
Molekyylibiologian ja geenitekniikan osa-alueita sisältävä opinnäytetyö toteutettiin Itä-Suomen yliopiston Farmasian laitoksella. Työ koostui kahdesta erillisestä osiosta: CAR- ja PXR-tumareseptorien ligandia sitovien domeenien (engl. LBD) kloonaamisesta eri lajeista sekä naudan promoottorialueiden reportterigeenimittauksesta. Reportterigeenimittaus oli osa professori Paavo Honkakosken sekä Padovan yliopiston yhteistyönä toteutettavaa tutkimusta. Opinnäytetyön tavoitteena oli kloonata eri lajeista CAR:n ja PXR:n LBD-alueita ja selvittää niiden sekvenssit. Kloo-naustyön epäonnistuttua työtä jatkettiin tutkimalla näiden tumareseptorien promoottorialueita reportterigeenimittauksella. Työssä testattiin CAR:n ja PXR:n vaikutusta seitsemän erilaisen naudan promoottorialueen aktiivisuuteen.
LBD-alueiden kloonaaminen ei onnistunut optimoinnista huolimatta. Reportterigeenimittauksen tulosten perusteella löydettiin kaksi promoottorialuetta, joiden aktiivisuutta molemmat tumareseptorit lisäsivät sekä yksi alue, jonka aktiivisuutta tumareseptorit vähensivät. Tulokset olivat yhteneväisiä molemmilla mittauskerroilla, mutta ne ovat kuitenkin vasta alustavia ja ne täytyy varmistaa uusintamittauksilla.