Characterization of Human Induced Pluripotent Stem Cells
Lampuoti, Jarkko (2013)
Lampuoti, Jarkko
Tampereen ammattikorkeakoulu
2013
Creative Commons Attribution-NonCommercial-ShareAlike 1.0 Suomi
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013121221085
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013121221085
Tiivistelmä
Indusoidut pluripotentit kantasolut (iPS-solut) ovat uudelleenohjelmoituja soluja, jotka on tuotettu kuljettamalla tietyt transkriptiotekijät erilaistuneeseen soluun. iPS-soluilla on lukuisia lupaavia käyttökohteita, kuten solu- ja kudosmallinnus, lääkeainetutkimukset sekä tulevaisuudessa mahdollisesti myös kliiniset hoidot. Indusoidut pluripotentit kantasolut ja alkion kantasolut ovat piirteiltään samankaltaisia ja niiden karakterisoinnissa ja erilaistamisessa hyödynnetään samoja menetelmiä. Tämän tutkimuksen tavoitteena oli varmistaa tutkimuksessa käytettävien iPS-solulinjojen laatu. Työn tarkoitus oli kvalitatiivisesti karakterisoida kuusi iPS-solulinjaa pluripotenssitekijöiden osalta käyttäen polymeraasiketjureaktiota, immunofluoresenssivärjäystä ja mikroskopointia.
Työssä tutkittiin virusperäisten siirtogeenien, solujen omien pluripotenssigeenien sekä alkiokerrosten geenien ilmentymistä PCR-tekniikalla. Pluripotenssitekijöiden ilmentymistä proteiinitasolla tutkittiin immunofluoresenssivärjäyksellä. Solukolonioiden muoto tutkittiin mikroskoopilla.
Kaikki karakterisoidut solulinjat ilmensivät lähes kaikkia tutkittuja pluripotenssitekijöitä. Virusperäiset siirtogeenit eivät olleet aktiivisia. Kolonioiden morfologia oli pluripotenteille kantasoluille tyypillinen.
Saatujen tulosten perusteella kaikki tutkitut solulinjat ovat pluripotentteja kantasolulinjoja ja niitä voidaan käyttää tutkimuksessa. PCR-analyyseihin liittyneiden ongelmien syitä ei tiedetä, mutta menetelmää voidaan tarvittaessa pyrkiä kehittämään. Geeniekspression erojen vertailemiseksi eri RNA-konsentraatioilla tulee kehittää paremman saannon tuottava eristysmenetelmä.
Työssä tutkittiin virusperäisten siirtogeenien, solujen omien pluripotenssigeenien sekä alkiokerrosten geenien ilmentymistä PCR-tekniikalla. Pluripotenssitekijöiden ilmentymistä proteiinitasolla tutkittiin immunofluoresenssivärjäyksellä. Solukolonioiden muoto tutkittiin mikroskoopilla.
Kaikki karakterisoidut solulinjat ilmensivät lähes kaikkia tutkittuja pluripotenssitekijöitä. Virusperäiset siirtogeenit eivät olleet aktiivisia. Kolonioiden morfologia oli pluripotenteille kantasoluille tyypillinen.
Saatujen tulosten perusteella kaikki tutkitut solulinjat ovat pluripotentteja kantasolulinjoja ja niitä voidaan käyttää tutkimuksessa. PCR-analyyseihin liittyneiden ongelmien syitä ei tiedetä, mutta menetelmää voidaan tarvittaessa pyrkiä kehittämään. Geeniekspression erojen vertailemiseksi eri RNA-konsentraatioilla tulee kehittää paremman saannon tuottava eristysmenetelmä.