Optimization of BDNF ELISA Method
Vikkula, Hanna-Kaisa (2013)
Vikkula, Hanna-Kaisa
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013120319707
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013120319707
Tiivistelmä
Neurotrofiini aivoperäinen hermokasvutekijä (BDNF) osallistuu keskeisellä tavalla hermo-so-lujen suojaamisen, erilaistumisen, ja muovautuvuuden säätelyyn. Monet kansantalou-delli-sesti merkittävät hermosairaudet on liitetty BDNF proteiinin ilmentymisen ja/tai toimin-nan häiriöihin.Professori Eero Castrénin tutkimusryhmä on aiemmin pystyttänyt BDNF proteiinin mittaa-miseen käytettävän ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) menetelmän. Menetel-mä pohjautuu keskeisesti hiiressä tuotettuihin monoklonaalisiin vasta-aineisiin. Tämän opin-näytetyön tavoitteina on ollut tunnistaa uusia vasta-ainepareja käytettäväksi mene-telmässä sekä itse menetelmän validointi. Menetelmä optimoitiin sensitiivisyyden, selektii-visyyden, detektiomenetelmän ja standardinsuoran suhteen.Tutkimuksissa löydettiin erittäin toimiva vasta-ainepari, ja niihin perustuva menetelmä se-lektiivisesti tunnisti neurotrofiiniperheen kasvutekijöistä ainoastaan BDNF proteiinia. Myös menetelmän herkkyys parani: lopullinen detektioraja ~15,2 pg/μl. Työssä tutkittiin lisäksi värireaktioon eli kolorimetriseen mittaukseen perustuvaan standardimittauksen rinnalla mahdollisuutta käyttää kemiluminesenssiin perustuvaa mittausta. Kyseinen mittaustapa näytti lupaavalta mutta jatkotutkimuksia tarvitaan sen validoimiseksi analyyttiseksi mene-telmäksi. Kaiken kaikkiaan opinnäytetyöltä vaadittavat tavoitteet saavutettiin selvästi. Brain derived neurotrophic factor, BDNF, regulates the survival, differentiation and plasticity of neurons. Emerging evidence suggests that many highly prevalent and disabling nervous system disorders are associated with altered synthesis and functions of BDNF.Eero Castrén’s research group has previously set up an ELISA (enzyme linked immunosorbent assay) for the detection of BDNF. The aim of the thesis was to optimize the ELISA method for the detection of brain derived neurotrophic factor (BDNF) with a new antibody combination and validate the optimized method. The method was optimized for sensitivity, selectivity, detection methods and for the standard curve.A new antibody combination was found. The new combination was more sensitive than the previous combination. The new minimum detection limit was ~15 pg/μl. The antibody combination was also specific only to BDNF when tested with other molecules of the same neurotrophin family. The method was based on colorimetric detection.Furthermore, the potential utilization of chemiluminescence based detection method was tested. This detection method showed promising but further studies are needed to validate its use for analytical assay.