Parvorokkovirus IgG- ja IgM-EIA-testien tuotekehitys diagnostiikkaan
Yli-Pelkonen, Oskari (2013)
Yli-Pelkonen, Oskari
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013120219367
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2013120219367
Tiivistelmä
Ihmisen parvorokkovirus on yleinen maailmanlaajuisesti esiintyvä patogeeni. Parvorokkovirusinfektiot ovat yleisimpiä pienten lasten keskuudessa, aikuisista seropositiivisia on jo 30-60 % ja vanhuksista jopa 85 %. Parvorokkovirusinfektion on todettu aiheuttavan muun muassa parvorokkoa, niveltulehduksia, aplastista anemiaa, sikiön turvotusta ja sikiökuolemia. Akuutin parvorokkovirusinfektion diagnosoiminen on tärkeää etenkin raskaana olevilta naisilta, sikiön turvallisuuden kannalta.
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli kehittää Ani Labsystems Oy:lle ELISA-testit parvo-rokkoviruksen IgG- ja IgM-vasta-aineiden havaitsemiseksi potilasnäytteestä. Tarkoituksena oli käyttää mahdollisimman paljon Labsystemsin tuotannossa jo olevia reagensseja ja tuotantomenetelmiä. Työ tehtiin osaksi yhteistyössä Haartman Instituutin kanssa. Työn pohjana oli rekombinantti biotinyloitu parvorokkoviruksen VP2-rakenneproteiinista koostuva antigeeni, joka oli tuotettu Haartman Instituutin virologian osastolla. Käytössä oli myös seeruminäytteitä, joista oli mittaustuloksia yhteistyölaboratorion parvorokkovirus ELISA-testeistä.
IgG-testin kehitystyön lopussa saadut mittaustulokset tunnetuista näytteistä korreloivat hyvin yhteistyölaboratorion tulosten kanssa. Kun verrattiin kehitetyllä IgG-testillä 20 seerumi-näytteestä saatuja tuloksia kilpailijoiden vastaavien testien tuloksiin, päästiin kahden kilpailevan valmistajan IgG-testien kanssa 95 %:n samankaltaisuuteen. Parvorokkovirus IgG-ELISA-testin tuotekehitys saatiin päätökseen. Seuraavana vaiheena projektissa on validointierien valmistus.
IgM-testin tulokset korreloivat tunnetuilla näytteillä yhteistyölaboratorion tulosten kanssa hyvin, mutta kehitystyön edetessä huomattiin, että muutamasta Labsystemsin seerumiva-rastosta seulotusta näytteestä saatiin vääriä positiivisia tuloksia. Nämä näytteet olivat positiivisia kehitettävällä testillä, mutta negatiivisia kahdella kilpailijan testillä. Konjugaattia ja edelleen konjugaatin valmistajaa vaihtamalla päästiin eroon vääristä positiivisista reaktioista. Parvorokkovirus IgM-ELISA-testin tuotekehitystä ei tämän insinöörityön puitteissa saatu aivan valmiiksi. Kehitystyötä jatketaan vielä, kunnes tuote on valmis markkinoille.
Tämän insinöörityön tarkoituksena oli kehittää Ani Labsystems Oy:lle ELISA-testit parvo-rokkoviruksen IgG- ja IgM-vasta-aineiden havaitsemiseksi potilasnäytteestä. Tarkoituksena oli käyttää mahdollisimman paljon Labsystemsin tuotannossa jo olevia reagensseja ja tuotantomenetelmiä. Työ tehtiin osaksi yhteistyössä Haartman Instituutin kanssa. Työn pohjana oli rekombinantti biotinyloitu parvorokkoviruksen VP2-rakenneproteiinista koostuva antigeeni, joka oli tuotettu Haartman Instituutin virologian osastolla. Käytössä oli myös seeruminäytteitä, joista oli mittaustuloksia yhteistyölaboratorion parvorokkovirus ELISA-testeistä.
IgG-testin kehitystyön lopussa saadut mittaustulokset tunnetuista näytteistä korreloivat hyvin yhteistyölaboratorion tulosten kanssa. Kun verrattiin kehitetyllä IgG-testillä 20 seerumi-näytteestä saatuja tuloksia kilpailijoiden vastaavien testien tuloksiin, päästiin kahden kilpailevan valmistajan IgG-testien kanssa 95 %:n samankaltaisuuteen. Parvorokkovirus IgG-ELISA-testin tuotekehitys saatiin päätökseen. Seuraavana vaiheena projektissa on validointierien valmistus.
IgM-testin tulokset korreloivat tunnetuilla näytteillä yhteistyölaboratorion tulosten kanssa hyvin, mutta kehitystyön edetessä huomattiin, että muutamasta Labsystemsin seerumiva-rastosta seulotusta näytteestä saatiin vääriä positiivisia tuloksia. Nämä näytteet olivat positiivisia kehitettävällä testillä, mutta negatiivisia kahdella kilpailijan testillä. Konjugaattia ja edelleen konjugaatin valmistajaa vaihtamalla päästiin eroon vääristä positiivisista reaktioista. Parvorokkovirus IgM-ELISA-testin tuotekehitystä ei tämän insinöörityön puitteissa saatu aivan valmiiksi. Kehitystyötä jatketaan vielä, kunnes tuote on valmis markkinoille.