Uuden menetelmän soveltuvuus DNA-pitoisuuden määrittämiseen Rikosteknisessä laboratoriossa
Parma, Jenni (2013)
Parma, Jenni
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2013
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201301241706
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-201301241706
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö tehtiin syksyllä 2012 Keskusrikospoliisin Rikosteknisen laboratorion DNA-ryhmässä Vantaalla. Työn tavoitteena oli verifioida uusi kvantitatiivinen menetelmä DNA-pitoisuuden määrittämiseksi rikospaikkanäytteistä eristetystä DNA:sta.
Tällä hetkellä DNA-ryhmällä on käytössä kaksi erillistä menetelmää, joilla rikospaikkanäytteistä määritetään ihmisperäinen autosomaalinen DNA (atDNA) ja miesperäinen Y-kromosomaalinen DNA (Y-DNA). Kahden menetelmän käyttö vie kaksin verroin aikaa ja resursseja. Uudella Qiagenin Investigator® Quantiplex HYres Kit -menetelmällä (HYres) näytteistä saataisiin samaan aikaan määritettyä sekä atDNA- että Y-DNA-pitoisuus, mikä säästäisi aikaa ja resursseja. Lisäksi menetelmältä toivotaan parempaa herkkyyttä ja tarkkuutta vanhaan Y-DNA:n pitoisuudenmääritysmenetelmään verrattuna.
Verifiointi toteutettiin vertailemalla uutta menetelmää jo käytössä oleviin menetelmiin pitoisuusalueella 0,0016–125 ng/µl. Testatut parametrit olivat menetelmän herkkyys, tarkkuus, toistettavuus ja mittausalueen lineaarisuus. Menetelmän Y-DNA selektiivisyys haluttiin myös varmistaa. Menetelmää varten ei ollut tarpeellista tehdä varsinaista menetelmän kehitystä laitteistolla, sillä se on jo verifioitu tällä hetkellä käytössä olevan atDNA-menetelmän verifioinnin yhteydessä ja toimii samoilla asetuksilla myös uudella menetelmällä.
Tutkimus osoitti, että menetelmän herkkyys ja tarkkuus pienillä pitoisuuksilla oli parempi Y-DNA määrityksissä verrattuna tällä hetkellä käytössä olevaan menetelmään ja atDNA:n osalta lähes vastaava kuin vertailumenetelmällä. Menetelmän mittausalue oli lineaarinen valmistajan lupaamalla mittausalueella, mutta selektiivisyys Y-DNA:n osalta kärsi kun läsnä oli suuri määrä naisen DNA:ta. Menetelmän toistettavuus oli myös riittävä.
Investigator® Quantiplex HYres Kitin soveltuvuus DNA-ryhmän käyttötarkoitukseen saatiin työssä varmistettua, ja menetelmä tullaan ottamaan käyttöön vuoden 2013 aikana.
Tällä hetkellä DNA-ryhmällä on käytössä kaksi erillistä menetelmää, joilla rikospaikkanäytteistä määritetään ihmisperäinen autosomaalinen DNA (atDNA) ja miesperäinen Y-kromosomaalinen DNA (Y-DNA). Kahden menetelmän käyttö vie kaksin verroin aikaa ja resursseja. Uudella Qiagenin Investigator® Quantiplex HYres Kit -menetelmällä (HYres) näytteistä saataisiin samaan aikaan määritettyä sekä atDNA- että Y-DNA-pitoisuus, mikä säästäisi aikaa ja resursseja. Lisäksi menetelmältä toivotaan parempaa herkkyyttä ja tarkkuutta vanhaan Y-DNA:n pitoisuudenmääritysmenetelmään verrattuna.
Verifiointi toteutettiin vertailemalla uutta menetelmää jo käytössä oleviin menetelmiin pitoisuusalueella 0,0016–125 ng/µl. Testatut parametrit olivat menetelmän herkkyys, tarkkuus, toistettavuus ja mittausalueen lineaarisuus. Menetelmän Y-DNA selektiivisyys haluttiin myös varmistaa. Menetelmää varten ei ollut tarpeellista tehdä varsinaista menetelmän kehitystä laitteistolla, sillä se on jo verifioitu tällä hetkellä käytössä olevan atDNA-menetelmän verifioinnin yhteydessä ja toimii samoilla asetuksilla myös uudella menetelmällä.
Tutkimus osoitti, että menetelmän herkkyys ja tarkkuus pienillä pitoisuuksilla oli parempi Y-DNA määrityksissä verrattuna tällä hetkellä käytössä olevaan menetelmään ja atDNA:n osalta lähes vastaava kuin vertailumenetelmällä. Menetelmän mittausalue oli lineaarinen valmistajan lupaamalla mittausalueella, mutta selektiivisyys Y-DNA:n osalta kärsi kun läsnä oli suuri määrä naisen DNA:ta. Menetelmän toistettavuus oli myös riittävä.
Investigator® Quantiplex HYres Kitin soveltuvuus DNA-ryhmän käyttötarkoitukseen saatiin työssä varmistettua, ja menetelmä tullaan ottamaan käyttöön vuoden 2013 aikana.