Mycoplasma pneumoniae -spesifisten IgG-luokan vasta-aineiden määritys non-kompetitiivisella ELISA-menetelmällä: soveltuvuuden arviointi ja työohjeen luominen mikrobiologian syventävälle kurssille
Borisov, Anna; Immonen, Tanja (2012)
Borisov, Anna
Immonen, Tanja
Oulun seudun ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112817025
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112817025
Tiivistelmä
Opinnäytetyömme aiheena oli Mycoplasma pneumoniae -spesifisten IgG-luokan vasta-aineiden määrittäminen non-kompetitiivisella ELISA-menetelmällä. ELISA-menetelmä perustuu antigeenin, spesifisen vasta-aineen sekä kaksoisvasta-aineen väliseen sitoutumiseen toisiinsa. Opinnäytetyömme tavoitteena oli arvioida määrityksen soveltuvuutta Oulun seudun ammattikorkeakoulun bioanalytiikan koulutusohjelman mikrobiologian syventävän kurssin harjoitustyöksi sekä laatia määritystä varten työohje.
Syventävällä mikrobiologian kurssilla opiskelijoiden osaamistavoitteina on syventää ja laajentaa osaamistaan muun muassa bakteriologiassa sekä perehtyä mikrobiologian laboratoriotutkimuksiin. Kurssin sisältö vaihtelee ajankohtaisten teemojen mukaan. Mycoplasma pneumoniaen aiheuttamat hengitystieinfektiot ovat yleistyneet huomattavasti muutamien viime vuosien aikana, mikä olikin yksi tärkeimmistä kriteereistä opinnäytetyömme aihetta valittaessa.
Opinnäytetyömme aineisto koostui Savyons LTD Oy:n valmistamasta kitistä, joka sisälsi määritystä varten tarvittavat reagenssit, kontrollit, standardit ja kuoppalevyn. Määritystä varten saimme positiivisiksi varmistettuja, muutaman vuoden vanhoja potilasnäytteitä Oulun yliopistollisen sairaalan mikrobiologian laboratoriosta.
Määrityksessä saadut tulokset poikkesivat olettamuksestamme; mikrobiologian laitokselta saamamme potilasnäytteet jäivät määrityksessä negatiivisiksi. Kitin ohjeessa annetut kriteerit kuitenkin täyttyivät, joten voimme olettaa kitin toimineen luotettavasti. Johtopäätöksenämme oli, että pitkäaikainen säilytys oli saattanut laskea potilasseerumeiden vasta-ainepitoisuudet kitin mittaustarkkuuden ulkopuolelle. Lisäksi mikrobiologian laboratorion käyttämä määritysmenetelmä on saattanut olla meidän käyttämäämme määritysmenetelmää herkempi. Potilaiden yksityisyyssuojan vuoksi emme kyenneet enää jäljittämään näytteiden alkuperää ja määritysmenetelmää mikrobiologian laitoksen tietokannasta.
Määritysmenetelmä toimi luotettavasti, vaikka potilasnäytteet jäivät negatiivisiksi. Mielestämme Mycoplasma pneumoniae -spesifisten vasta-aineiden määritys non-kompetitiivisella ELISA-menetelmällä soveltuu erittäin hyvin mikrobiologian syventävälle kurssille, koska työn suorittaminen on mahdollista annetussa aikarajassa. Myöskään kitin rajallinen säilyvyys ja hinta ei aiheuta ongelmia, koska kaikki kuoppalevyt tulevat käytetyiksi yhden harjoitustyön aikana. Suosittelemme kuitenkin käyttämään jatkossa tuoreita potilasnäytteitä.
Syventävällä mikrobiologian kurssilla opiskelijoiden osaamistavoitteina on syventää ja laajentaa osaamistaan muun muassa bakteriologiassa sekä perehtyä mikrobiologian laboratoriotutkimuksiin. Kurssin sisältö vaihtelee ajankohtaisten teemojen mukaan. Mycoplasma pneumoniaen aiheuttamat hengitystieinfektiot ovat yleistyneet huomattavasti muutamien viime vuosien aikana, mikä olikin yksi tärkeimmistä kriteereistä opinnäytetyömme aihetta valittaessa.
Opinnäytetyömme aineisto koostui Savyons LTD Oy:n valmistamasta kitistä, joka sisälsi määritystä varten tarvittavat reagenssit, kontrollit, standardit ja kuoppalevyn. Määritystä varten saimme positiivisiksi varmistettuja, muutaman vuoden vanhoja potilasnäytteitä Oulun yliopistollisen sairaalan mikrobiologian laboratoriosta.
Määrityksessä saadut tulokset poikkesivat olettamuksestamme; mikrobiologian laitokselta saamamme potilasnäytteet jäivät määrityksessä negatiivisiksi. Kitin ohjeessa annetut kriteerit kuitenkin täyttyivät, joten voimme olettaa kitin toimineen luotettavasti. Johtopäätöksenämme oli, että pitkäaikainen säilytys oli saattanut laskea potilasseerumeiden vasta-ainepitoisuudet kitin mittaustarkkuuden ulkopuolelle. Lisäksi mikrobiologian laboratorion käyttämä määritysmenetelmä on saattanut olla meidän käyttämäämme määritysmenetelmää herkempi. Potilaiden yksityisyyssuojan vuoksi emme kyenneet enää jäljittämään näytteiden alkuperää ja määritysmenetelmää mikrobiologian laitoksen tietokannasta.
Määritysmenetelmä toimi luotettavasti, vaikka potilasnäytteet jäivät negatiivisiksi. Mielestämme Mycoplasma pneumoniae -spesifisten vasta-aineiden määritys non-kompetitiivisella ELISA-menetelmällä soveltuu erittäin hyvin mikrobiologian syventävälle kurssille, koska työn suorittaminen on mahdollista annetussa aikarajassa. Myöskään kitin rajallinen säilyvyys ja hinta ei aiheuta ongelmia, koska kaikki kuoppalevyt tulevat käytetyiksi yhden harjoitustyön aikana. Suosittelemme kuitenkin käyttämään jatkossa tuoreita potilasnäytteitä.