Neljän Lactobacillus amylovorus -kannan probioottisten ominaisuuksien testaaminen
Kalekivi, Jenni (2012)
Kalekivi, Jenni
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112616434
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012112616434
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö tehtiin Helsingin yliopiston Eläinlääketieteellisen tiedekunnan mikrobiologian oppiaineelle. Työn tarkoituksena oli tutkia neljän sian suolistosta eristetyn Lactobacillus amylovorus-kannan mahdollisia probioottisia ominaisuuksia. Laktobasilleille tehdyillä testeillä selvitettiin niiden sitoutumistehokkuutta sian ruoansulatuskanavan musiineihin sekä mahdollista kykyä estää enterotoksiinia tuottavan Escherichia coli -kannan kiinnittymistä porsaan suolistosta peräisin olevan solulinjan soluihin. Enterotoksinen Escherichia coli on yleinen porsaiden vieroitusripulin aiheuttaja. Sairastuneet porsaat kasvavat terveitä porsaita hitaammin sekä saattavat kuolla, mistä on taloudellista haittaa siantuottajille.
Kiinnittymistä sian suoliston limaan kokeiltiin sekä kaupallisilla sian vatsan musiineilla että siasta eristetyllä suolilimalla. Laktobasillit leimattiin SYTO9-fluorokromilla ja bakteerien kiinnittymisprosentit selvitettiin mittaamalla näytteiden fluoresenssit. Kiinnittymisenestokokeet suoritettiin neljällä erilaisella koejärjestelyllä, joista jokainen toistettiin vähintään kolme kertaa. Kokeiden tarkoitus oli selvittää, miten laktobasillit vaikuttavat kolibakteerin kiinnittymiseen IPEC-1-soluihin (porcine intestinal epithelial cell line), jos laktobasillit lisätään ennen kolibakteeria tai sen kanssa samaan aikaan sekä pystyvätkö ne syrjäyttämään jo kiinnittyneitä kolibakteereja. Kokeissa käytetty Escherichia coli leimattiin tritioidulla tymidiinillä ja näytteiden radioaktiivisuus mitattiin nestetuikelaskurilla.
Musiinikiinnittymiskokeissa tutkittavien laktobasillikantojen havaittiin kiinnittyvän testialustoihin, mutta toistokokeilla saatiin vaihtelevia tuloksia kiinittymistehokkuuden suhteen. Laktobasillit vaikuttivat pystyvän kiinnittymään paremmin kaupallisiin sian vatsan musiineihin kuin sian suolistosta eristettyyn limaan. Kiinnittymisenestokokeissa yhden laktobasillikannan havaittiin inhiboivan enterotoksista kolibakteeria, mutta kannan inhibointikyky oli positiivisena kontrollina testeissä käytettyyn laktobasillikantaan verrattuna heikkoa. Kolme muuta kantaa onnistuivat toisinaan inhiboimaan kolibakteeria, mutta useimmiten niiden lisäämisellä ei ollut merkitystä kolibakteerin kiinnittymiseen IPEC-1-soluihin.
Kiinnittymistä sian suoliston limaan kokeiltiin sekä kaupallisilla sian vatsan musiineilla että siasta eristetyllä suolilimalla. Laktobasillit leimattiin SYTO9-fluorokromilla ja bakteerien kiinnittymisprosentit selvitettiin mittaamalla näytteiden fluoresenssit. Kiinnittymisenestokokeet suoritettiin neljällä erilaisella koejärjestelyllä, joista jokainen toistettiin vähintään kolme kertaa. Kokeiden tarkoitus oli selvittää, miten laktobasillit vaikuttavat kolibakteerin kiinnittymiseen IPEC-1-soluihin (porcine intestinal epithelial cell line), jos laktobasillit lisätään ennen kolibakteeria tai sen kanssa samaan aikaan sekä pystyvätkö ne syrjäyttämään jo kiinnittyneitä kolibakteereja. Kokeissa käytetty Escherichia coli leimattiin tritioidulla tymidiinillä ja näytteiden radioaktiivisuus mitattiin nestetuikelaskurilla.
Musiinikiinnittymiskokeissa tutkittavien laktobasillikantojen havaittiin kiinnittyvän testialustoihin, mutta toistokokeilla saatiin vaihtelevia tuloksia kiinittymistehokkuuden suhteen. Laktobasillit vaikuttivat pystyvän kiinnittymään paremmin kaupallisiin sian vatsan musiineihin kuin sian suolistosta eristettyyn limaan. Kiinnittymisenestokokeissa yhden laktobasillikannan havaittiin inhiboivan enterotoksista kolibakteeria, mutta kannan inhibointikyky oli positiivisena kontrollina testeissä käytettyyn laktobasillikantaan verrattuna heikkoa. Kolme muuta kantaa onnistuivat toisinaan inhiboimaan kolibakteeria, mutta useimmiten niiden lisäämisellä ei ollut merkitystä kolibakteerin kiinnittymiseen IPEC-1-soluihin.