PAH-yhdisteiden määrittäminen lihamatriisista GC-MS/MS-menetelmällä : Menetelmän kehitys ja osittainen validointi
Aho, Hanna (2012)
Aho, Hanna
Metropolia Ammattikorkeakoulu
2012
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012061412714
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2012061412714
Tiivistelmä
Tämä opinnäytetyö tehtiin elintarviketurvallisuusvirasto Eviralle. Työn tarkoituksena oli kehittää menetelmä polysyklisten aromaattisten hiilivetyjen (PAH-yhdisteet) määrittämi-seksi lihatuotteista. Nykyään seurataan bentso(a)pyreenin määrää elintarvikkeissa, mutta lainsäädäntö PAH-yhdisteiden suhteen on kiristymässä vuoden 2012 syksyllä ja jatkossa aletaan seurata myös niin sanottujen PAH4-yhdisteiden (bentso(a)pyreeni, kryseeni, bentso(a)antraseeni ja bentso(b)fluoranteeni) kokonaismäärää.
Tässä menetelmässä näytteet kylmäkuivataan ja PAH-yhdisteet uutetaan nopeutetulla liuotinuutolla (ASE®). Uuton jälkeen näyte puhdistetaan kiinteäfaasiuuttopylväässä (SPE) ja yhdisteet analysoidaan kaasukromatografi-tandemmassaspektrometrillä (GC-MS/MS).
Menetelmän kehitykseen kuului erilaisten kiinteäfaasiuuttopylväiden vertailu ja sentrifugaalihaihduttimen käyttöönotto. SPE-pylväiden vertailussa havaittiin jo käytössä oleva Supelcon ENVI-ChromP-pylväs sopivimmaksi. Sentrifugaalihaihduttimeen hankittiin konsentroivat adapterit. Adapterit estävät näytteen haihtumisen kuiviin eikä näytteitä tarvitse vahtia niin usein.
Kehitetyn analyysimenetelmän validoinnissa määritettiin spesifisyys, selektiivisyys, lineaarisuus, toistettavuus, sisäinen uusittavuus, takaisinsaanto, havaitsemis- ja määritysraja sekä mittausepävarmuus. Kaikki parametrit täyttivät asetetut kriteerit. Takaisinsaantoprosentiksi 2,5 µg/kg:n pitoisuudella saatiin 99 - 115 % ja keskihajonnaksi 6 - 13 %, 5,0 µg/kg:n pitoisuudella 101 - 113 % ja keskihajonnaksi 5 - 10 % ja 7,5 µg/kg:n pitoisuudella 96 - 112 % ja keskihajonnaksi 7 - 11 %.
Tässä menetelmässä näytteet kylmäkuivataan ja PAH-yhdisteet uutetaan nopeutetulla liuotinuutolla (ASE®). Uuton jälkeen näyte puhdistetaan kiinteäfaasiuuttopylväässä (SPE) ja yhdisteet analysoidaan kaasukromatografi-tandemmassaspektrometrillä (GC-MS/MS).
Menetelmän kehitykseen kuului erilaisten kiinteäfaasiuuttopylväiden vertailu ja sentrifugaalihaihduttimen käyttöönotto. SPE-pylväiden vertailussa havaittiin jo käytössä oleva Supelcon ENVI-ChromP-pylväs sopivimmaksi. Sentrifugaalihaihduttimeen hankittiin konsentroivat adapterit. Adapterit estävät näytteen haihtumisen kuiviin eikä näytteitä tarvitse vahtia niin usein.
Kehitetyn analyysimenetelmän validoinnissa määritettiin spesifisyys, selektiivisyys, lineaarisuus, toistettavuus, sisäinen uusittavuus, takaisinsaanto, havaitsemis- ja määritysraja sekä mittausepävarmuus. Kaikki parametrit täyttivät asetetut kriteerit. Takaisinsaantoprosentiksi 2,5 µg/kg:n pitoisuudella saatiin 99 - 115 % ja keskihajonnaksi 6 - 13 %, 5,0 µg/kg:n pitoisuudella 101 - 113 % ja keskihajonnaksi 5 - 10 % ja 7,5 µg/kg:n pitoisuudella 96 - 112 % ja keskihajonnaksi 7 - 11 %.