Virusproteiinien tuotto hyönteissoluissa bakuloviruksen avulla
Susi, Anastasia (2011)
Lataukset:
Susi, Anastasia
Turun ammattikorkeakoulu
2011
All rights reserved
Julkaisun pysyvä osoite on
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011121918888
https://urn.fi/URN:NBN:fi:amk-2011121918888
Tiivistelmä
Työn tarkoituksena oli tuottaa bakuloviruksen avulla tiettyjä pikornavirusproteiineja hyönteissoluissa. Menetelmässä käytettiin Bac-to-Bac-kitin sisältämää FastBac™-vektoria, jota käyttäen pintaproteiineja koodaava DNA-jakso siirtyy DHc10Bac E. coli -soluissa olevaan bacmidiin. Bacmidi on muokattu bakuloviruksesta, ja kun se transfektoidaan hyönteissoluihin, bacmidiin kloonatut pikornavirusproteiinit alkavat ekspressoitua.
Työssä kloonattiin neljän eri pikornaviruksen VP1-proteiinia koodaavaa geeniä. Nämä olivat peräisin CAV9- ja CBV3-enteroviruksista ja HPEV1- ja HPEV3-parechoviruksista. CAV9-, CBV3- ja HPEV1-VP1-proteiineja koodaavat geenit monistettiin plasmideista. HPEV3-VP1-proteiinia koodittava geeni (virus-RNA) eristettiin suoraan potilasnäytteestä RT-PCR:n avulla. VP1-geenit (insertit) kloonattiin TA-vektoriin, tuotettiin E. coli -soluissa ja siirrettiin TA-vektorista restriktioentsyymi-leikkausta ja ligaatiota käyttämällä FastBac™-vektoriin. Yhdistelmävektori transfektoitiin kompetentteihin DHcBac10 E. coli -soluihin, joissa insertti siirtyi bacmidiin.
Työssäni tuotettavia pikornavirusproteiineja on suunniteltu käytettäväksi serologisissa tutkimuksissa vasta-ainesitojina, immunogeeneinä vasta-aineiden tuotossa ja antigeeneina erilaisissa in vitro –kokeissa, joissa tutkitaan proteiinien sitoutumista solutekijöihin.
Työssä kloonattiin neljän eri pikornaviruksen VP1-proteiinia koodaavaa geeniä. Nämä olivat peräisin CAV9- ja CBV3-enteroviruksista ja HPEV1- ja HPEV3-parechoviruksista. CAV9-, CBV3- ja HPEV1-VP1-proteiineja koodaavat geenit monistettiin plasmideista. HPEV3-VP1-proteiinia koodittava geeni (virus-RNA) eristettiin suoraan potilasnäytteestä RT-PCR:n avulla. VP1-geenit (insertit) kloonattiin TA-vektoriin, tuotettiin E. coli -soluissa ja siirrettiin TA-vektorista restriktioentsyymi-leikkausta ja ligaatiota käyttämällä FastBac™-vektoriin. Yhdistelmävektori transfektoitiin kompetentteihin DHcBac10 E. coli -soluihin, joissa insertti siirtyi bacmidiin.
Työssäni tuotettavia pikornavirusproteiineja on suunniteltu käytettäväksi serologisissa tutkimuksissa vasta-ainesitojina, immunogeeneinä vasta-aineiden tuotossa ja antigeeneina erilaisissa in vitro –kokeissa, joissa tutkitaan proteiinien sitoutumista solutekijöihin.