Kvalitatiivisten Rubella IgG- ja Rubella IgM -entsyymi-immunomenetelmien optimointi ja modifiointi kvantitatiiviseen muotoon
Loading...
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Kemian tekniikan korkeakoulu |
Master's thesis
Unless otherwise stated, all rights belong to the author. You may download, display and print this publication for Your own personal use. Commercial use is prohibited.
Author
Date
2016-05-17
Department
Major/Subject
Biotekniikka ja elintarviketekniikka
Mcode
KE3002
Degree programme
Language
fi
Pages
81+10
Series
Abstract
Vihurirokko on Rubella-viruksen aiheuttama infektiotauti. Terveelle aikuiselle tauti on pääsääntöisesti vaaraton. Raskauden aikana sairastettu vihurirokko voi kuitenkin aiheuttaa sikiövaurioita, joista voi seurata syntymättömälle vauvalle vakavia kehitysvammoja. Taudin tunnistamiseen on kehitetty erilaisia diagnostisia testimenetelmiä. Tässä työssä modifioitiin jo olemassa olevista kvalitatiivisista Rubella-viruksen IgG- sekä IgM-luokan vasta-aineita tunnistavista entsyymi-immunomenetelmistä kvantitatiiviset testiversiot sekä optimoitiin jo olemassa olevia kvalitatiivisia testejä. Tavoitteena oli saada valmiiksi testit, joiden avulla vasta-aineiden määrän muutosta potilaassa pystyttäisiin seuraamaan. Lisäksi tavoitteena oli saada parannettua jo olemassa olevien testien erottelukykyä. Testien optimointi aloitettiin vertailemalla adsorptiokyvyiltään erilaisia kuoppalevytyyppejä. Tämän jälkeen testattiin kuoppalevyjen päällystykseen käytettäviä kahden eri antigeenitoimittajan Rubella-virusantigeenejä. Päällystysantigeenin valinnan jälkeen verrattiin erilaisten blokkausmenetelmien vaikutusta epäspesifisten sitoutumiskohtien peittämisessä. Lopuksi valmistettiin Rubella IgG -testille kalibraattorisarja ja Rubella IgM -testille kolme eritasoista kontrollia ja testattiin testien toimivuutta erilaiset tilastollisen testien avulla. Testien optimoinnin jälkeen erityisesti Rubella IgM -testin erottelukyky parani entiseen testiversioon nähden. Tuotekehitysvaiheen alustavien testausten perusteella voitiin todeta, että molemmat testit toimivat optimoinnin jälkeen halutulla tavalla. IgM-testin kohdalla ei ehditty selvittää, mistä testin huono korrelaatio muiden valmistajien vastaavien testien kanssa johtui. Muutoin testit ovat valmiita tuotannossa tehtäviin testien validointivaiheisiin.Rubella is an infectious disease caused by the Rubella-virus. For healthy adults the disease is most often harmless. Rubella infection during pregnancy may however cause fetal damages and the unborn baby may develop serious birth defects. Several different laboratory tests have been developed to diagnose Rubella-virus infections. In this master's thesis, the already existing qualitative enzyme-linked immunosorbent assays for Rubella-virus IgG and IgM antibodies were optimized and modified into quantitative test formats. The aim was to develop tests by which the changes in antibody concentrations in patient could be monitored. In addition the aim was to improve the sensitivities of the current qualitative assays. The optimization of the assays was started by comparing different microtiter plate types. After that two different Rubella-virus coating antigens from two different antigen distributors were compared. Following this comparison different blocking procedures were compared to prevent nonspecific binding. Finally a calibrator set for the Rubella IgG assay and three different controls for the Rubella IgM assay were prepared. The test performance was tested with various statistical data analysis. Subsequent to the optimization of the assays especially the sensitivity of the Rubella IgM assay was improved compared to the previous test version. Based on the preliminary tests performed in the research and development phase it can be stated that the performance of both assays after the optimization was as desired. The reason for the poor correlation between the in-house IgM assay and competitors IgM assays remains to be solved. Otherwise the assays are ready to be transferred into the validation phaseDescription
Supervisor
Nordström, KatrinaThesis advisor
Kokkonen, AnttiKeywords
vihurirokko, Rubella, ELISA, vasta-aine, menetelmäkehitys
